液相色譜儀主要有進樣系統、輸液系統、分離系統、檢測系統和數據處理系統。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統,樣品溶液經進樣器進入流動相,被流動相載入色譜柱(固定相)內,由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數,在兩相中作相對運動時,經過反復多次的吸附-解吸的分配過程,各組分在移動速度上產生較大的差別,被分離成單個組分依次從柱內流出,通過檢測器時,樣品濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀,數據以圖譜形式打印出來高效。
液相色譜儀的組成:
1、輸液系統
包括溶劑柜、真空脫氣機、溶劑混合器、高壓泵等,其中核心部分是泵;泵的作用提供足夠的驅動力使流動相通過填充緊密的色譜柱。
洗脫方式也分為兩種:
(1)等度洗脫:在同一分析周期內流動相組成保持恒定,適合于組分數目較少,性質差別不大的樣品。
(2)梯度洗脫:采用兩種(或多種)不同極性的溶劑,在分離過程中按一定程序連續改變流動相的濃度配比和極性的一種洗脫模式。用于分析組分數目多、性質差異較大的復雜樣品。
2、進樣系統
把分析試樣有效地送入色譜柱進行分離。一般有自動進樣器和手動進樣器,進樣量應不小于定量環體積的5-10倍(最少3倍)。
3、分離系統
主要是色譜柱,色譜柱是一根裝滿填料的管子。色譜柱的材料有不銹鋼、塑料、玻璃等,其尺寸(內徑、長短)不盡相同;色譜柱填料主要有硅膠基質和聚合物基質,填料的粒徑不盡相同。
4、檢測器
對檢測器的要求:靈敏度高、重現性好、線性范圍寬、死體積小、對溫度及流量的變化不敏感等。主要有紫外檢測器、熒光檢測器、示差檢測器等。
結構特點:
1、液相色譜儀是以液體作為流動相的色譜分離方法;
2、流動相具有運載樣品分子和選擇性分離的雙重作用;
3、適用于高沸點、大分子、強極性和熱穩定性差的大分子化合物(常溫進樣不破壞藥